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农药登记急性毒性试验方法_续

作者: 来源: 日期:2019/2/27 15:21:35 人气:282

上篇农药登记急性毒性试验方法小编简述了急性经皮、急性经口和急性吸入试验方法,本文主要简述急性眼刺激性/腐蚀性、皮肤刺激性、皮肤变态反应试验。

眼刺激性/腐蚀性试验

Eye irritation/corrosion test

1. 定义

眼睛刺激性 eye irritation

眼睛表面接触受试物后发生的可逆性炎性变化,在21d内完全恢复。

眼睛腐蚀性 eye corrosion

眼睛表面接触受试物后发生的不可逆性组织损伤,在21d内不能完全恢复。

2. 试验目的

评估受试物毒性,对哺乳动物的眼睛刺激或腐蚀的程度的分级提供依据;

确定受试物对哺乳动物是否有刺激作用或腐蚀作用;

为其他毒理学试验剂量的选择提供依据;

便于标签的管理。

3. 试验方法

受试物以一次剂量滴入每只实验动物的一侧眼睛结膜囊内,以未作处理的另一侧眼睛作为自身对照。在规定的时间间隔内,观察动物眼睛的刺激和腐蚀作用程度并评分,?#28304;?#35780;价受试物对眼睛的刺激作用,观察期限应能足以评价刺激效应的可逆性和不可逆性。

受试物

液体受试物一般不需要稀释,直接使用原液,染毒量为0.1mL。固态受试物一般将其?#24515;コ上?#31881;状,过200?#21487;福?#26579;毒剂量为0.1mL。气溶胶产品需撑开兔眼,在眼正前方10cm处,对准兔眼按压气溶胶喷雾1s。

实验动物

首选体重为2.0kg~3.0kg的健康成年白色家兔。

试验操作

轻轻拉开家兔一侧眼睛的下眼睑,将受试物0.1mL(或100mg)滴入结囊膜中,使上、下眼睑被动闭合1s,以防止受试物丢失。另一侧眼睛不处理作自身对照。

71h刺激反应不消失,应另选用3只家兔进行冲洗效果试验,即给家兔眼滴入(放入)受试物后30s,用足量、流动较快但又?#25442;?#24341;起动物眼睛损伤的水流冲洗至少30s。

4. 观察指标

在滴入(放入)受试物后1h、24h、48h、72h以及第4天和第7天对动物眼睛进行检查。对角膜、虹膜、结膜以及其他损害效应记录并报告。

皮肤刺激性/腐蚀性试验

Dermal irritation/corrosion test

1. 定义

皮肤刺激性 dermal irritation

皮肤涂覆受试物后局部发生的可逆性炎性变化。

皮肤腐蚀性 dermal corrosion

皮肤涂覆受试物后局部发生的不可逆性组织损伤。

2. 试验目的

评估受试物毒性,对哺乳动物的皮肤局部刺激或腐蚀的程度的分级提供依据;

确定受试物对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用或腐蚀作用;

为其他毒理学试验剂量的选择提供依据;

便于标签的管理。

3. 试验方法

将受试物一次涂覆于受试动物的皮肤上,采用自身对照,在规定的时间间隔内,观察动物皮肤局部刺激作用的程度并进行评分,?#28304;?#35780;价受试物对皮肤的刺激作用,观察期限应足以评价该作用的可逆性或不可逆性。

受试物

液体受试物一般不需要稀释,直接使用原液。固态受试物一般将其?#24515;コ上?#31881;状,并用水或其他无刺激性溶剂充分润湿。

实验动物

首选体重为2.0kg~3.0kg的健康、成年、皮肤无异常和无损伤的白色家兔。

试验操作

试验前约24h,将实验动物背部脊柱两侧被毛去除,不可损伤表皮,去毛范围至少各为6cm2。取受试物0.5mL(g)涂在一侧去毛皮肤上,用二层纱布和一层玻璃纸或类似物?#21754;牽?#20877;用无刺激性胶布和绷带加以固定。另一侧皮肤作为对照,除不加受试物外,其他处理和实验动物相同。采用封闭试验,敷用时间约为4h。然后?#20204;?#27700;或无刺激性溶剂清洗受试区皮肤。

4. 观察指标

于清除受试物后的1h、24h、48h和72h观察涂抹部位皮肤反应,一般不超过14d。

皮肤变态反应(致敏)试验

Skin sensitization test

1. 定义

皮肤刺激 Skin sensitization

测试动物在反复接触受试物后,皮肤对一种物质产生的免疫原性皮肤反应。

2. 试验目的

评估受试物毒性,对哺乳动物的皮肤变态的程度的分级提供依据;

确定受试物对哺乳动物是否可引起皮肤变态反应;

为其他毒理学试验剂量的选择提供依据;

便于标签的管理。

3. 试验方法

局部封闭?#31185;?#35797;验(Buehler test,BT)和豚鼠最大值试验(Guinea pig maximization test,GPMT)是实验动物通过多次皮肤涂抹(诱导接触)或皮内注射受试物10d~14d(诱导阶段)后,给予激发剂量的受试物,观察实验动物,并与对照动物比较对激发接触受试物的皮肤反应强?#21462;?/p>

实验动物

选用健康、成年雌性或雄性豚鼠。

试验操作

局部封闭?#31185;?#35797;验(Buehler test,BT)

诱导接触:试验前约24h,将豚鼠背部左侧去毛,去毛范围为4cm2~6cm2。将受试物约0.2mL(g)涂在实验动物去毛区皮肤上,以二层纱布和一层玻璃纸?#21754;牽?#20877;以无刺激胶布封闭固定6h。第7天和第14天以同样方法重复一次。激发接触:末次诱导后14d,将约0.2mL(g)的受试物涂鱼豚鼠背部右侧2cm×2cm去毛区(接触前24h去毛),然后用二层纱布和一层玻璃纸?#21754;牽?#20877;以无刺激胶布固定6h。试验组动物至少20只,对照组至少10只。

豚鼠最大值试验(Guinea pig maximization test,GPMT)

诱导接触(第0天)受试物组?#33322;?#39048;背部去毛区(2cm×4cm)中线两侧划定三个对称点,每点皮内注射0.1mL下述溶液:

第1点 1:1FCA/水或生理盐水的混合物;

第2点 耐受浓度的受试物;

第3点 1:1FCA/水或生理盐水配制的受试物,浓度与第2点相同。

对照组:注射部位同受试物组,每点皮内注射0.1mL下述溶液;

第1点 1:1FCA/水或生理盐水的混合物;

第2点 未稀释的溶液

第3点 1:1FCA/水或生理盐水配制的浓度为500g/L的溶液。

诱导接触(第7天)将涂有0.5g(mL)受试物的2cm×4cm滤纸敷贴在上述再次去毛的注射部位,然后用两层纱布,一层玻璃纸?#21754;牽?#26080;刺激胶布封闭固定48h。对照组和试验组动物于第二次诱导接触前24h在注射部位涂抹10%十二烷基硫酸钠(SLS)0.5mL。对照组仅用溶剂作诱导处理。将豚鼠躯干部去毛,用涂有0.5g(mL)受试物的2cm×2cm滤纸敷贴在去毛区。激发接触(第21天)将豚鼠躯干部去毛,用涂有0.5g(mL)受试物的2cm×2cm滤纸敷贴在去毛区,然后再用两层纱布,一层玻璃纸?#21754;牽?#26080;刺激胶布封闭固定24h。对照组作同样处理。试验组至少10只。对照组至少5只。

4. 观察指标

激发接触后24h和48h观察右侧皮肤反应,按下表评价。

1 变态反应试验(局部封闭?#31185;?#27861;)皮肤反应评分

皮肤反应

评分

红斑和焦痂形成

 

无红斑

0

轻微红斑

1

明显红斑

2

中度至重度红斑

3

严重红斑至轻微焦痂形成

4

 

 

水肿形成

 

无水肿

0

轻微水肿(勉强可见)

1

中?#20154;?#32959;(皮肤隆起轮廓清楚)

2

重?#20154;?#32959;(皮肤隆起约1mm或超过1mm)

3

最高积分

7

 

2 变态反应试验(豚鼠最大值法)皮肤反应评分

皮肤反应

评分

未见皮肤反应

0

散在或小块红斑

1

中度红斑或融合红斑

2

重度红斑和水肿

3


当然,农药登记申请资料中登记试验资料除了毒理学中本文介绍的六项急性毒性,还包括产品化学、药效、残留和环境影响等试验以及评估报告。


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